BD 559763 Annexin V PE Apoptosis kit 凋亡早期检测试剂盒
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-20 18:36 

BD 559763  Annexin V PE Apoptosis kit 凋亡早期检测试剂盒
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货号: 559763
供应商: 上海伟进生物科技有限公司
数量: 12
英文名: Annexin V PE Apoptosis kit
保质期: 长期
保存条件: 4℃
规格: 100T

BD 556547 Annexin V FITC Apoptosis Kit凋亡试剂盒
 
556547  Annexin V FITC Apoptosis Kit  100TST
559763  Annexin V PE Apoptosis kit    100TST
 
凋亡检测操作流程
 
一、Annexin V 检测凋亡细胞膜的改变
 
试剂及溶液:
 
A.对于单独购买的试剂:
 
a) 10X Binding Buffer (货号:556454):0.1 M HEPES,pH 7.4;1.4 M NaCl;25 mM CaCl 2。使用前稀
释至 1X。
 
b) Propidium Iodide(PI,货号:556463):建议与以下试剂同时使用 Annexin V-FITC(货号: 556420,
556419)或 Annexin V-Biotin (货号: 556418,556417)
 
c) Via-Probe™ (货号:555816 ):核酸染料 7-AAD。建议与以下试剂同时使用 Annexin V-PE(货号:
556422,556421)或 Annexin V-Biotin(货号:556418,556417)。
 
d) 1X PBS Buffer (货号: 554781):8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na2HPO 4 · 7H20, 0.24 g KH2PO4 , 加水至
1L。调整 pH 值至 7.2。 高压灭菌室温保存。
 
B.对于凋亡检测试剂盒(货号:556547
 
a)  FITC Annexin V (组分编号: 51-65874X):每个样本 5 μl 用量。
 
b)  Propidium Iodide (PI,组分编号: 51-66211E)):现成的核酸染料。每个样本 5 μl 用量。
 
c)  10X Annexin V Binding Buffer(组分编号: 51-66121E): 0.1 M Hepes/NaOH (pH 7.4), 1.4 M NaCl,
25 mM CaCl2.使用时用双蒸水配制成 1X。
 
操作步骤:
 
1.取 Falcon 试管,按标本顺序编好阴性对照管和标本管号。
 
2.使用冷的 PBS 缓冲液洗细胞两次,再用 1´ Binding Buffer 缓冲液制成 1´106 细胞/ml 的悬液。
 
3. Falcon 试管中加入 100 µl 细胞悬液。
 
4.按以下体积加入 Annexin V 与核酸染料:
 
管号          名称            荧光标记 Annexin V            核酸染料:
1           阴性对照                 -                         -
2            单阳 1               AV-FITC                      -
3            单阳 2                  -                         PI
4            样本                 AV-FITC                      PI
 
5.轻轻混匀,室温(20°C ~25°C)避光处放置 15 分钟。
 
6. *使用 Annexin V-Biotin 试剂进行检测时:
 
h  1´Binding Buffer缓冲液洗细胞一次,去上清。
 
h  1´Binding Buffer缓冲液100µl溶解SAv-FITC试剂0.5µg,加入到细胞管中。
 
h 轻轻混匀。加入5µl PI,室温(20-25°C)避光处放置15分钟。
 
7.各试验管中分别加入 1´Binding Buffer 缓冲液 400µl。1 小时内上流式细胞仪测定结果。

Annexin V Blocking 
 
待测细胞与未标记的重组 Annexin V 预孵育,然后进行实验,是 Annexin V 细胞凋亡检测的质量控制。
原理是预先阻断 Annexin V-FITC 的结合位点,这样可以证明 Annexin V-FITC 凋亡分析的特异性。
 
1.  使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次,再用1´Binding Buffer缓冲液制成1´106细胞/ml的悬液。
 
2.  在5ml的培养管中加入100µl细胞悬液(约1´105个细胞)。
 
3.  加入5-15µg纯化的重组Annexin V。注意,不同的细胞系,以及凋亡的不同阶段,其Annexin V位点
饱和所需要的纯化的重组Annexin V含量不同。某些情况下,为达到最好效果,可以减少细胞数量,
0.5´105个细胞加5-15µg纯化的重组Annexin V。
 
4.  轻轻混匀,室温反应15分钟。
 
5.  加入5µl的Annexin V-FITC或/和PI,轻轻混匀,室温避光处放置15分钟。
 
6.  各试验管中分别加入1´Binding Buffer缓冲液400µl。
 
7.  1小时内上流式细胞仪测定结果。

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温馨提示:不可用于临床治疗。
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